Verbesserung des Zell-ELISA zur Bestimmung von Anti-Endothelzell-Antikörpern (AECA)

Journal/Book: Z Rheumatol 1998; 57 Suppl. 1: 42 (D 15). 1998;

Abstract: Poliklinik f. Rheumatologie Medizinische Universität Lübeck/Rheumaklinik Bad Bramstedt GmbH Bad Bramstedt Einleitung: AECA werden üblicherweise mittels Zell-ELISA auf Nabelschnur-Endothelzellen (HUVEC) bestimmt die auf Gelatin-beschichtetem Material kultiviert werden. AECA positive Seren von Vaskulitis-Patienten enthalten zusätzlich Autoantikörper gegen extrazelluläre Matrix. Wir zeigen hier daß diese Autoantikörper durch ihre Bindung an Gelatin häufig zu einem falsch positiven AECA Test führen. Falsch positive Werte können durch Korrektur der Bindung an Gelatin vermieden werden. Methoden: Seren von 80 Gesunden und 161 Patienten mit Systemischen Vaskulitiden/Kollagenosen wurden parallel auf ELISA-Platten gemessen die nur mit Gelatin beschichtet sind sowie in einem Zell-ELISA mit HUVEC auf Gelatin. Die auf Gelatin gemessenen OD-Werte wurden von den HUVEC/Gelatin-Werten subtrahiert. Zusätzlich wurde ein neues Kulturmaterial getestet (Cell+ Saarstedt) daß die HUVEC-Kultur ohne Gelatin-Grundlage erlaubt. Die Zell-Linie EAhy926 (häufig gebrauchtes Substitut für HUVEC) wurde bzgl. ihres AECA-Bindungsverhaltens mit HUVEC verglichen. Ergebnisse: 70 % der Patienten-Seren waren AECA positiv im Standard-ELISA ohne Korrektur bzgl. der Gelatin-Bindung. Nach Korrektur blieben nur 40 % der Seren AECA positiv. Nach Präabsorption an Gelatin reagierten die "wirklich" AECA positiven Seren weiterhin mit HUVEC. 75 % der tatsächlich AECA positiven Seren wurden von HUVEC auf cell+ Material nicht als positiv erkannt. 47 % der Seren die mit HUVEC reagierten waren bei Verwendung von EAhy926 Zellen AECA negativ. EAhy926 Zellen reagierten nach einigen Passagen nicht mehr mit von Willbrand Faktor. Schluß: Mit Gelatin reaktive Autoantikörper können AECA vortäuschen wenn der Test nicht bzgl. der Bindung an Gelatin korrigiert wird. Das cell+ Material erlaubt die Kultur von HUVEC ohne Vorbeschichtung mit Gelatin aber viele AECA positive Seren werden nicht erkannt. EAhy926 Zellen fehlen wichtige EC-Antigene und können bzgl. AECA nicht als Substitut für HUVEC empfohlen werden. le

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