Spezifische Expression von Kinesin-Like Protein Cenp-E in synovialen Fibroblasten von Patienten mit Rheumatoider Arthritis (RA)

Journal/Book: Z Rheumatol 1998; 57 Suppl. 1: 33 (F 29). 1998;

Abstract: 1Klinik und Poliklinik für Innere Medizin l und 2Klinik und Poliklinik für Orthopädie Universität Regensburg; 3Sidney Kimmel Cancer Center San Diego; 4Zentrum für Experimentelle Rheumatologie USZ Zürich Zielsetzung: Die Zerstörung von Gelenken durch einwachsendes Synovialgewebe ist typisch für die RA. An der Invasionszone in den Knorpel und Knochen finden sich häufig transformiert erscheinende Fibroblasten wobei über die Genregulation die zu diesem aggressiven Phänotyp führt bisher wenig bekannt ist. Ziel dieser Studie war daher mittels RNA Fingerprint (RAP-PCR) im Vergleich zu Osteoarthritis(OA)-Fibroblasten differentiell exprimierte Gene zu erfassen. Methoden: Synoviale Fibroblasten von 10 Patienten mit RA und 6 Patienten mit OA wurden kultiviert und nach 3 - 5 Passagen geerntet. Nach RNA Extraktion wurde diese im ersten Schritt der RAP-PCR mittels verschiedenen arbiträren 10-Basen Primern in cDNA überschrieben. Die PCR-Amplifikation erfolgte dann mittels 8 verschiedenen 10-Basen Primem für insgesamt 35 Zyklen bei niedrigen Annealing-Temperaturen gefolgt von paralleler elektrophoretischer Trennung und Sequenzanalyse der differentiell exprimierten RAP-PCR Produkte. Ergebnisse: Im Durchschnitt konnten je Primerpaar ca. 100 verschiedene RNAs amplifiziert werden wobei der größte Teil sowohl von RA- als auch von OA-Fibroblasten exprimiert wurde. Etwa 2 % der exprimierten Gene wiesen einen Polymorphismus auf und insgesamt 5 RAP-PCR Produkte wurden ausschließlich aus der RNA von RA Fibroblasten amplifiziert. Hiervon wurde ein RAP-PCR Produkt mit einer Länge von 450 Basen sehr stark differentiell exprimiert. Die nachfolgende Sequenzanalyse zeigte eine sehr große Homologie (> 98 %) zu humanem Zentromer Kinesin-ähnlichem Protein CENP-E auf. Zusammenfassung: Die Untersuchungen zeigen daß mittels RAP-PCR differentiell exprimierte Gene in RA synovialen Fibroblasten identifiziert werden können. ... le

Zurück | Weiter