Analyse von differentiell exprimierten Genen in Fibroblasten verschiedener Gelenke eines Patienten mit Rheumatoider Arthritis mittels RNA Fingerprint

Journal/Book: Z Rheumatol 1998; 57 Suppl. 1: 51 (P 26). 1998;

Abstract: 1Klinik und Poliklinik für Innere Medizin I und 2Klinik und Poliklinik für Orthopädie der Univ. Regensburg; 3Sidney Kimmel Cancer Center San Diego; 4Zentrum für Experimentelle Rheumatologie USZ Zürich Zielsetzung: Die progressive Gelenkdestruktion ist typisch für die rheumatoide Arthritis (RA) wobei die invasiv wachsenden Fibroblasten in Kultur ihren aggressiven Phänotyp beibehalten. Da die entzündliche Aktivität und der Grad der Gelenkdestruktion bei verschieden Gelenken eines Patienten erheblich variieren können untersuchten wir mittels Differential Display (RAP-PCR) ob bestimmte Gene in RA-Fibroblasten in unterschiedlichen Gelenken eines Patienten mit RA differentiell exprimiert werden. Methoden: Synoviale Fibroblasten eines Patienten mit schwerer RA wurden im Rahmen einer Synovektomie aus zwei unterschiedlichen Gelenken gewonnen und für 3 - 5 Passagen kultiviert. Nach RNA Extraktion wurde diese im ersten Schritt der RAP-PCR mittels 3 verschiedenen arbiträren 10-Basen Primern in cDNA überschrieben. Die PCR-Amplifikation erfolgte dann mittels 3 verschiedenen 10-Basen Primern für insgesamt 35 Zyklen bei niedrigen Annealing-Temperaturen gefolgt von paralleler elektrophoretischer Trennung der differentiell exprimierten RAP-PCR Produkte. Ergebnisse: Im Durchschnitt konnten je Primerpaar ca. 100 verschiedene RNAs amplifiziert werden wobei der größte Teil der isolierten RNAs von den Fibroblasten beider Gelenke exprimiert wurde. Je Primerpaar konnten allerdings 1 - 2 differentiell exprimierte RNAs amplifiziert werden und insgesamt konnten 15 verschiedene PCR Produkte isoliert werden welche einer Sequenzanalyse zugeführt werden können. Interessanterweise war die Zahl der jeweils hochregulierten Gene in beiden Gelenken ähnlich (n = 7 und n = 8). Zusammenfassung: Die Ergebnisse der Studie zeigen daß in verschiedenen Gelenken eines Patienten mit RA jeweils unterschiedliche Gene hochreguliert sind. Aus der Analyse der differentiell exprimierten Gene ergeben sich im Vergleich zum klinischen Erscheinungsbild hieraus möglicherweise Hinweise zur Beurteilung von Aktivität und Progression der Gelenkdestruktion. le

Zurück | Weiter