Funktionelle Studie zu zwei krankheitsassoziierten Polymorphismen in der Promotor-Region des humanen Tumor Nekrose Faktor alpha Gens

Journal/Book: Z Rheumatol 1999; 58 Suppl. 1: I/34 (F 18). 1999;

Abstract: E. Reuss; I. Medizinische Klinik und Poliklinik der Johannes Gutenberg Universität Mainz TNF-alpha ist ein zentraler Mediator bei verschiedenen entzündlichen Gelenkerkrankungen. Individuelle Unterschiede in der TNF-alpha Produktion spielen möglicherweise eine entscheidende Rolle bei der Entwicklung von Arthritiden und deren Verlauf. Der TNF-alpha-Promotor beinhaltet zwei G nach A Transitionen (TNF308.2 und TNF238.2) deren Einfluß auf die Transkriptions-Aktivität noch weitgehend unklar ist. In Fall-/Kontroll-Studien wurde das TNF238.2-Allel mit Psoriasis Arthritis und der Abwesenheit radiologisch nachweisbarer Erosionen bei Patienten mit Rheumatoider Arthritis assoziiert. In dieser Arbeit wurden die drei verschiedenen Promotor-Allele (Wildtyp TNF308.2 TNF238.2; Region -585 bis +106) durch PCR amplifiziert und in das Luciferase-Reportergen-Plasmid pGL3 (Promega) kloniert. In einem zweiten Ansatz wurde zusätzlich die 3'-untranslatierte Region (3'-UTR) des TNF-alpha Gens hinter das Luciferase Gen eingefügt. Anschließend wurden die Transkriptions-Aktivitäten der Promotor-Konstrukte in transienten Transfektions-Assays vor und nach Stimulation der Zellen mit PMA und Ionomycin getestet. Es wurden jeweils Mehrfach-Messungen durchgeführt. Die Ergebnisse wurden mit Hilfe des T-Tests ausgewertet. In Jurkat- und Raji-Zellen zeigte die TNF238.2-Variante eine um ca. 30% erniedrigte Transkriptions-Aktivität gegenüber dem Wildtyp-Allel nach Stimulation (p<0 02). Diese Unterschiede in der Promotorstärke blieben auch bei Transfektion der Konstrukte mit 3'-UTR bestehen. Für das TNF308.2-Allel fanden sich in Jurkat-Zellen keine Unterschiede zum Wildtyp während diese Variante in Raji-Zellen zu einer signifikant erniedrigten Transkription führte. Das TNF308.2-Reportergen-Konstrukt mit 3'-UTR hatte in Jurkat-Zellen eine signifikant geringere Aktivität zur Folge. Diese Ergebnisse zeigen daß die TNF238.2-Variante eine signifikant erniedrigte Promotor-Aktivität besitzt. Dies ist in Übereinstimmung mit in vitro-Studien die eine signifikant geringere TNF-alpha Produktion in T-Zellen von TNF238.2-heterozygoten Probanden und PsA Patienten zeigen. ... le

Zurück | Weiter