Optimierung einer PCR zum Nachweis von Borrelia burgdorferi sensu lato in Synovialflüssigkeit

Journal/Book: Z Rheumatol 1998; 57 Suppl. 1: 37 (F 45). 1998;

Abstract: 1Abt. Rheumatologie Medizinische Hochschule Hannover; 2Klinik für Rheumatologie St. Josef-Stift Sendenhorst; 3Abt. Parasitologie Tierärztliche Hochschule Hannover Fragestellung: In Europa werden neben Infektionen mit Borrelia burgdorferi sensu stricto zunehmend auch Infektionen mit B. afzelii und garinii beschrieben. Aufgrund der Variabilität des OspA-Plasmids erkennen viele PCR Verfahren diese Stämme jedoch nicht oder nur mit geringer Sensitivität. Darüberhinaus sind die meisten PCR Verfahren nicht für eine Diagnostik in Synovialflüssigkeit (SF) optimiert. Ziel dieser Untersuchung ist die Etablierung einer PCR zum Nachweis aller drei Borrelienstämme und Optimierung des Verfahrens für die Diagnostik in SF. Methodik: B. burgdorferi sensu stricto (B31) B. garinii und B. afzelii wurden kultiviert und die Keimzahlen mittels Dunkelfeldmikroskopie bestimmt. Im Doppelansatz wurden Verdünnungsreihen der 3 Borrelienstämme in Synovialflüssigkeiten unterschiedlicher Zellzahl (n = 3) von Patienten ohne Hinweis auf eine Borrelieninfektion hergestellt. Die Aufreinigung des SF-Pellets erfolgte nach Inkubation mit Proteinase K und Cetyltrimethylammoniumbromid (CTAB)-Extraktion mittels Qiaex gel extraction kit (Qiagen Hilden Germany). Für die outer-PCR wurden SL-primer (Demaerschalk 1995) für die nested-PCR MRL7/1 1a-Primer (Liebling 1993) eingesetzt. Die Auswertung erfolgte nach Agarosegelelektrophorese Färbung mit Ethidiumbromid und UV-Licht Bestrahlung durch Größenvergleich des Amplifikats mit einem Marker. Zusätzlich wurden die Amplifikate sequenziert. Ergebnisse: Mit dem beschriebenen PCR- Verfahren konnten in SF reproduzierbar alle drei Borrelien-Stämme nachgewiesen werden. Es wurden folgende Nachweisgrenzen gefunden: B. burgdorferi B31 (Keime/ml SF) B. afzelii (Keime/ml SF) B. garinii (Keime/ml SF) 10.550 Leuko./µl SF 100 1 1 - 10 3.200 Leuko./µl SF 1 - 10 1 1 100 Leuko./µl SF 1 - 10 1 1 Auch in SF von Patienten mit vermuteter Lyme-Borreliose war mit dem beschrieben Verfahren ein Borrelien-DNA Nachweis möglich. ... le

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