Humane monoklonale Antikörper aus dem Synovialgewebe und der Synovialflüssigkeit von Patienten mit Rheumatoider Arthritis erkennen ein Peptid in der variablen Region der Ig-kappa-Kette

Journal/Book: Z Rheumatol 1998; 57 Suppl. 1: 47 (P 10). 1998;

Abstract: 1Poliklinik und Klinik für Innere Medizin I Universität Regensburg Klinische Forschergruppe für Rheumatologie Universität Freiburg Ziel dieser Studie war die Untersuchung der lokalen B-Zell-Antwort im Entzündungsprozeß des Synovialgewebes von Patienten mit rheumatoider Arthritis (RA). Aus B-Zellen die sowohl das Synovialgewebe als auch die Synovialflüssigkeit infiltrieren wurden Hybridome hergestellt. Mit Hilfe der Elektrofusion konnten in einem Fusionsexperiment aus 3 x 106 synovialen Lymphozyten (3 - 5 % B-Zellen) 31 wachsende Hybridome hergestellt werden. Dieses Verfahren wurde ohne B-Zellanreicherung oder Stimulation durchgeführt. Von den wachsenden Hybridomen produzierten 4 Klone Immunglobuline (3 x IgM und 1 x IgG). Der IgG produzierende Klon (E12) wurde rekloniert und seine Subklasse und leichte Kette in einem ELISA bestimmt. Um die Antigenspezifität dieses Antikörpers zu klären verwendeten wir eine Peptid-Phage-Display-Bank die alle theoretisch möglichen 7-mer Peptide repräsentiert. Diese Phagen-Bank wurde verwendet um dasjenige Peptid zu identifizieren das als Antigen an den Antikörper E12 bindet. Phagen die an den Antikörper gebunden haben wurden vereinzelt und sequenziert. In den durchgeführten Sequenzierungen wurde das Peptid H L T F G P G identifiziert. Dieses Peptid entspricht den Aminosäuren 96 - 101 der variablen Region der Immunglobulin-kappa-Kette. Die Bindung des Antikörpers E12 an das ganze Molekül der Kappa-Kette konnte in einem ELISA verifiziert werden. Zusammenfassend ist die Kombination von Antikörperproduktion aus kleinen Zellpopulationen mit Hilfe der Elektrofusion und die Phage-Display-Technik zur Klärung des antigenen Peptids eine effektive Methode zur Identifizierung von neuen Antigenen. le

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