Verschiedene Kulturbedingungen und Matrizes führen zu unterschiedlicher Expression von Proteinase-3 mRNA in Endothelzellen und renalen tubularen Epithelzellen

Journal/Book: Z Rheumatol 1998; 57 Suppl. 1: 39 (D 2). 1998;

Abstract: 1. Medizinische Klinik der Johannes Gutenberg-Universität Mainz; 1Zentrum für Experimentelle Rheumatologie Zürich Antineutrophile zytoplasmatische Antikörper (ANCA) bilden eine Familie von Autoantikörpern gegen zytoplasmatische Proteine von neutrophilen Granuloyten. Das Zielantigen der c-ANCA die Serin-Protease-3 (PR-3) wird allerdings nicht nur von Granulozyten exprimiert sondern auch von nicht hämatopoetischen Zellen verschiedener Gewebe. Ziel der vorliegenden Arbeit war es die Regulation der PR-3 mRNA Expression in Endothelzellen und tubulären Epithel-Zellen der Niere unter verschiedenen Kulturbedingungen (Zytokin-Stimulation Sauerstoff-Entzug Wachstum auf verschiedenen Matrizes) mit Hilfe der RT-PCR-Technik zu erforschen. Methoden: Humane endotheliale Nabelschnurzellen (HUVEC) und renale tubulare Epithelzellen (TEZ) wurden gemäß verschiedener Methoden kultiviert: Huvec wurden stimuliert mit TNF-alpha und VFGF kultiviert mit normalem Sauerstoffgehalt (20 %) und reduziertem Sauerstoffgehalt (10 %) und gezüchtet auf verschiedenen Matrizes: ECM (physiologische extrazelluläre Matrix) bcoll1 (Matrix boviner Herkunft) S-Matrix (basierend auf Soja-Extrakt) und Matri-gel (Extrakt aus den Basalmembranen des Engelbreth-Holm-Swarm mouse tumor). Sämtliche Zellen wurden trypsinisiert und die RNA wurde nach der Methode von Qiagen isoliert. Die RT-PCR wurde gemäß dem Protokoll von Gibco zur Detektion der PR-3 mRNA durchgeführt. Ergebnisse: Die HUVEC kultiviert mit 10 % Sauerstoff und zusätzlicher Stimulation mit TNF-alpha zeigten im Regelfall eine konstante Expression der PR-3 mRNA von 10 Minuten bis zu 2 Stunden Zytokin-Stimulation. Im Vergleich hierzu zeigen gleich behandelte HUVEC mit 20 % Sauerstoff lediglich eine Expression nach 10minütiger und 4stündiger Zytokin-Stimulation. TEZ präsentieren ein ähnliches Expressionsmuster nach 10 - 20minütiger und 1stündiger Stimulation mit TNF-alpha. VEGF-stimulierte HUVEC ergaben eine PR-3 mRNA Expression nach einer und vier Stunden Stimulation. Kombinierte Stimulation der HUVEC mit VEGF und TNF-alpha resultierte in einer Expression von PR-3 mRNA nach 10 - 20 Minuten und 1 - 2 Stunden Stimulation. ... le

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